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呼吸道常见病毒的临床表现及实验室诊断

引起的以发热、呼吸道卡他症状和出疹为主的急性传染病，广泛流行于全世界。肺炎是麻疹最常见的并发症，约占10％或稍多，大多见于出疹期。麻疹病毒只有一个血清型，6个月至5岁儿童发病率最高，病后免疫力持久。

      流行性腮腺炎是由腮腺炎病毒(MUMPS)所致的急性呼吸道传染病，以腮腺的非化脓性肿胀和疼痛为特征，传播途径主要为通过唾液飞沫吸人。腮腺炎病毒的基因组为单股负链RNA，只有一个血清型。1～2岁儿童腮腺炎病毒感染主要表现为呼吸道和肺部症状，冬春两季的发病人数要多于夏季。

      【实验室诊断】

      1．病毒分离及鉴定(以RSV为例)

      (1)操作程序：用负压吸取患儿鼻咽深部分泌物1～2ml，加入PBS2～3ml，用吸管反复吹打至分泌物完全混匀，2000rpm离心10分钟，弃去上清、沉淀物再次做上述处理，用上清液接种于Hep-2或MDCK细胞，在含有2％牛血清的MEM培养基中生长，33℃旋转培养，连续观察细胞变化，出现特征性融合病变者为阳性；若盲传3代仍无病变出现，则确定为阴性。

      (2)方法学评价：该法虽然特异性较强，但试验周期时间长，一般1～2周才能有结果，且成本较高,如果传代细胞不敏感，或存在细菌、支原体混合感染等情况，会导致病毒分离的阳性率低，标本内病毒含量少时亦会出现假阴性结果，因此临床不作为常规检测使用。

      2．间接法ELISA(以麻疹病毒IgM为倒)

      (1)实验原理：间接法HLISA主要用于检测抗体，它是将已知抗原包被在固相载体，加上待测抗体的标本，最后用酶标抗抗体间接的将其检出。

      (2)操作程序：①稀释标本将血清标本用稀释液1：100倍稀释，放置15分钟后加入酶标板中，每次实验加入阴、阳性对照及空白对照各一孔，每孔100μl，室温30分钟；②洗板4次，在吸水纸上拍干；③加入酶标记物，每孔100μl，室温30分钟；④重复步骤②；⑤人底物液，每孔l00μl，室温避光15分钟显色；⑥加入终止液，每孔100μl，以450nm波长测量其OD值；⑦结果判断：临界值=阳性对照值?0．2 阴性对照值

      标本OD值&lt临界值?0．85，判为阴性结果，标本OD值&gt临界值?1.15，判为阳性结果，介于二者之间为可疑值，应于7～14日后重新采集新鲜样品检测。

      3．注意事项

      (1)检测IgM抗体时，因试荆盒提供的稀释液中已经含有类风湿因子(RF)吸附剂，可去除RF的干扰，但稀释后必须放置15分钟以上或4℃过夜，加样时应吸取上清层，不要吸到沉淀物。

      (2)间接法ELISA可用于检测麻疹病毒IgM／IgG，腮腺炎病毒IgM／IgG，及腺病毒IgM等。此方法适合于回顾性诊断或做流行病学调查，对早期诊断意义有限。

      (3)小婴儿免疫反应较差，RSV抗体升高较慢，恢复期也见不到4倍以上升高，因此ELISA法检测RSV抗体不用于临床诊断。

      4．临床意义患儿感染麻疹病毒后，出疹3天内75％可检测出IgM抗体，7～14天IgM达到高峰，一般一个月后IgM明显下降，2～3个月内完全消失。IgG抗体常与IgM抗体同时或稍晚出现，25～30天达更高，6个月内下降2～4倍．以后下降缓慢，维持在一定水平。所以在出疹后3天至一个月内检测患儿血清IgM抗体，可为临床医生确定其病原提供依据，发病后7～14天内用ELISA法检测MV-IgM抗体阳性率最高。